新冠抗原檢測試劑可輔助評估新型冠狀病毒感染狀況和臨床診斷，實(shí)現對疑似人群進(jìn)行早期分流和快速管理，能較好地滿(mǎn)足疫情防控即時(shí)檢測、即時(shí)報告、及早發(fā)現的需求，有利于提高早發(fā)現能力，提高監測預警靈敏度，降低檢測成本。

目前，市面上抗原檢測產(chǎn)品基本采用免疫層析技術(shù)。類(lèi)似婦女檢測懷孕的驗孕棒，是一種簡(jiǎn)易而快速的檢測手段，無(wú)需要設備介入，居民在家就可以自行檢測，分鐘之間即可獲得結果，今天我們就來(lái)解析解析什么是免疫層析？

免疫層析技術(shù)是在20世紀80年代初在發(fā)達國家興起并被用于檢測血清蛋白的一種結合了免疫技術(shù)和色譜層析技術(shù)的快速檢測分析方法。

檢測原理：在層析時(shí)，標記物與待測物的絡(luò )合物被相應的配體捕獲而濃集顯色于硝酸纖維素膜上的檢測線(xiàn)，以纖維膜上顯色條帶的有無(wú)、顏色深淺和反射光線(xiàn)來(lái)定性或定量檢測結果。在即時(shí)檢測（POCT）中應用極為廣泛。

免疫層析試紙條一般由樣品墊、結合墊、硝酸纖維素（NC）膜、檢測線(xiàn)（T線(xiàn)）、質(zhì)控線(xiàn)（C線(xiàn)）、吸水墊、聚苯乙烯（PS）底板等部分組成。

（圖片來(lái)源網(wǎng)絡(luò )）

根據待檢測物的大小和抗原抗體結合的方式，分為雙抗體夾心法、競爭法、間接法。雙抗體夾心法：主要檢測多抗原位點(diǎn)的生物大分子；競爭法：主要檢測半抗原、即不具備免疫原性的小分子化合物（如藥物、毒素、糖類(lèi)等）；間接法：主要用于血清中抗體檢測，純化或者重組的抗原固定于NC膜上，標記大多為蛋白A，如人狂犬病毒IgG檢測等。

根據標記物質(zhì)的不同又可分為：有色測流層析、熒光測流層析、磁信號測流層析等。其中對應的不同特性的標記物大概有：有色納米顆粒（乳膠微球、膠體金、膠體碳、膠體硒）、熒光納米顆粒（時(shí)間分辨熒光、熒光微球、量子點(diǎn)、上轉換磷光）、磁性納米顆粒、脂質(zhì)體、稀土納米材料等。

下面，我們重點(diǎn)來(lái)講一講在獲證的新冠抗原檢測試劑中，膠體金、乳膠微球、熒光微球這3種標記物分別有什么區別。

膠體金即膠體納米金，是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑（如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等）作用下，聚合成一定大小的金顆粒，在靜電的作用下成為穩定的膠體狀態(tài)，形成帶負電的疏水膠溶液。膠體金標記主要包括三種作用力，即靜電作用、疏水作用及金硫鍵。膠體金在弱堿環(huán)境下帶負電荷，可與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團形成牢固的結合。由于這種結合是靜電結合，所以不影響蛋白質(zhì)的生物特性。

乳膠法是以彩色乳膠微球作為載體的間接凝集試驗。吸附可溶性抗原在其表面，特異性抗體與之結合后，產(chǎn)生凝集反應。目前，常用的免疫層析用彩色微球多為采用內部包埋法制備而得，染料處于微球內部，不易泄露，有比較穩定的形態(tài)結構。

用于免疫層析產(chǎn)品中的彩色乳膠微球的粒徑比膠體金顆粒大（彩色乳膠微球粒徑在200nm-400nm，膠體金粒徑在20-40nm），相對靈敏度更高。

乳膠微球的顏色鮮艷，并且能夠包被氨基、羧基、硫基等多種官能團，因此，既可以通過(guò)化學(xué)反應形成共價(jià)鍵的形式偶聯(lián)抗體也可以通過(guò)吸附的方式偶聯(lián)抗體（膠體金僅可通過(guò)吸附的方式偶聯(lián)抗體）。對于含有多個(gè)硫原子類(lèi)的分子，用乳膠微球的標記效果更好。

膠體金法和乳膠法的操作流程基本類(lèi)似，以雙抗夾心法為例：

雙抗夾心法演示（圖片來(lái)源網(wǎng)絡(luò )）

熒光微球是指將熒光物質(zhì)，比如熒光素，通過(guò)物理和化學(xué)等方法標記在粒子的表面或包埋在微球內部，一般為球形，直徑在納米到微米之間，受到激發(fā)光的激發(fā)可發(fā)出肉眼可見(jiàn)的熒光。

熒光微球形狀和大小相對穩定，粒徑均勻、單分散性好、發(fā)光效率高、重復性好，與生物體之間相互作用后產(chǎn)生的各種反應好，吸附性強、比表面積大、表面反應能力強和凝集作用大等?；静皇芡饨绛h(huán)境的影響，熒光物質(zhì)的光學(xué)穩定性較好，需要通過(guò)免疫熒光分析儀讀取熒光強度大小。熒光微球發(fā)射出來(lái)的熒光信號持續強而穩定，易于用儀器檢測其熒光信號。

熒光免疫層析就是利用熒光微球表面修飾的功能基團（如羧基）與抗原或抗體等共價(jià)結合，通過(guò)熒光物質(zhì)發(fā)出穩定而強的熒光信號從而進(jìn)行定量檢測。

（圖片來(lái)源網(wǎng)絡(luò )）

總體來(lái)說(shuō)，這3種免疫層析的標記物各有千秋。膠體金法和乳膠法的特點(diǎn)在于不需使用特殊儀器，肉眼即可判斷，并且操作簡(jiǎn)便、檢測時(shí)間短，其中乳膠法的顯色能力更強，結果顯示更直觀(guān)。熒光免疫層析法相較于膠體金法、乳膠法而言靈敏度更高，但在使用的時(shí)候均需要配套的熒光檢測器，目前沒(méi)有居家使用型，儀器價(jià)格高。另外，熒光微球的成本較之于膠體金、乳膠高，可及性偏差。

在新一輪的新冠疫情之下，新冠抗原檢測試劑的上市無(wú)疑大大方便了居民檢測，縮短了檢測時(shí)間，有利于提高早發(fā)現能力，并且新冠抗原檢測的成本比核酸檢測低?！翱乖Y查+核酸診斷”的模式推廣，針對不同場(chǎng)景、不同適用人群，各自發(fā)揮作用，進(jìn)一步優(yōu)化新冠病毒檢測策略，服務(wù)疫情防控需求。

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